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BN27183-1000T
1000T
¥510.00
產品描述
產品信息:
本試劑盒有效期為一年
產品簡介:
Bradford 蛋白濃度測定法是目前常用的靈敏度較高的蛋白濃度測定方法之一,其實驗原理是根據考馬斯亮藍(Coommassie Brilliant Blue)G-250與蛋白質的堿性和芳香族氨基酸特別是精氨酸(Arginine) 在酸性介質中結合后,溶液轉變?yōu)樗{色,使染料的最大吸收峰從 465nm 遷移到 595nm,且測定的吸光 值與蛋白濃度成正相關關系;即可通過測定蛋白在 595nm 處的吸光度,推算蛋白濃度,進而進行定量測定。
本法通過吸光值,推算蛋白濃度,實現了蛋白濃度測定的快速性和簡便性。靈敏度高,比 Lowry 法大約高四倍,測定速度快、簡單,僅需一種試劑即可,且不受大多數樣品中化學試劑的影響。
注意事項:
1. Bradford 染色液使用前,需將其恢復至室溫,有利于提高檢測的靈敏度;并在使用前充分混勻
2. 標準曲線也有輕微的非線性,因而不能用 Beer 定律進行計算,而只能用標準曲線來測定未知蛋白質的濃度;為了得到更精確的結果,每個蛋白梯度和樣品均需做復孔,每次試驗都必須建立標準曲線
3. Bradford 法測定蛋白濃度對大多數化學物質的兼容性比較好,比如對還原劑 DTT 的兼容性高達 5mM;但會受到略高濃度的去垢劑影響,需確保 SDS 低于 0.01%,Triton X-100 低于 0.05%,Tween 20/ 60/80 低于 0.015%等
4. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作
使用說明:
一.配制 BSA 標準品體系(線性范圍 100-1500ug/ml):
可參考下表配制不同濃度的標準品梯度 ,并充分混勻,避免氣泡生成:
標準品稀釋液原則上應與為蛋白樣品的溶解液一致,但也可用蒸餾水、生理鹽水或 PBS 進行稀釋
二. 蛋白濃度測定:
(1)分別取 5μl 不同濃度蛋白標準品和待測樣品加入 96 孔板中;若樣品不足,可以用稀釋液進行稀釋,但須記錄樣品稀釋比例
(2)各孔加入 200μl G250 染色液,充分振蕩混勻,室溫孵育 2-3min
(3)用酶標儀測定 595nm 處的吸光度
(4)以標準蛋白濃度(ug/ml)為橫坐標,用 OD 值為縱坐標繪制標準曲線,根據測出的待測樣品的 A595 值,即可得出樣品的蛋白質濃度,進而進行定量計算
參考標準曲線:
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